Dégagement lent de la virémie humaine parvovirus B suite à une infection aiguë

Le parvovirus B est un agent pathogène commun cliniquement significatif. La réévaluation de la cinétique virale après une infection aiguë a montré que le virus n’est pas rapidement éliminé des hôtes sains malgré une résolution précoce des symptômes. Ces résultats remettent en question notre conception actuelle de la pathogenèse du virus. la gestion de l’infection

n semaines après l’inclusion du premier individu dans l’étude, des échantillons de sérum et de PBMC ont été prélevés à intervalles réguliers chez tous les patients, ainsi que des antécédents médicaux et des données sur les symptômes cliniques. Les échantillons de sérum ont été analysés pour l’IgG et l’IgM B en utilisant un EIA commercial Biotrin International Pour l’évaluation des niveaux d’ADN B, un nouveau test PCR en temps réel spécifique au génotype du parvovirus TaqMan a été développé. Bref, le sérum a été extrait à l’aide d’un extracteur MagnaPure automatisé Roche Diagnostics utilisant le kit d’isolation d’acide nucléique total LC Roche Le test a été réalisé dans un système de détection de séquence ABI Applied Biosystems dans un mélange réactionnel -μL contenant du TaLMan Universal PCR Master Mélanger Applied Biosystems, μL d’ADN matrice, μmol / L de chaque amorce, et μmol / L pour les cycles constitués de s à ° C et s à ° C Les amorces suivantes ont été utilisées dans l’amplification: sens, ‘-ACAAGCCTGGGCAAGTTAGC-‘, et antisens, ‘-GGCCCAGCTTGTAGCTCATT-‘, positionnées sur les positions B des nucléotides génomiques – et -, respectivement les numéros se réfèrent à GenBank AY Detection a été fourni par une sonde étiquetée FAM-TAMRA Applied Biosystems avec la séquence «-CAACTACCCGGTACTAACTATGTTGGGCCTGG-» à des positions de nucléotides génomiques B – plasma virémique AB, déterminé pour contenir × équivalents génomiques geq / mL, lot BPL aimablement fourni par le Dr Kerr , Biotrin International, a été utilisé comme standard La sensibilité du test était geq / réaction, comme déterminé par des tests répétés de dilutions en série du standard BPL Les contrôles négatifs ont été extraits et analysés entre chaque échantillon de patient tout au long de la procédure. et le modèle et l’addition standard ont été effectués dans des laboratoires distincts. Les échantillons qui avaient des résultats positifs de PCR quantitative étaient partiellement arrêté pour évaluer le génotype viral en utilisant un test séparé Les amorces externes dans cet essai étaient les suivantes: sens, «-GTGGTGAAAGCTCTGAAGAACTCA-», et antisens «-GCCCAGGCTTGTGTAAGTCTTC-», aux positions de nucléotides génomiques B – et -, respectivement Les amorces internes étaient comme suit : sens, ‘-CGGGACCAGTTCAGGAGAATCA-‘, et antisens, ‘-GGGGTGGTCAGATAACTGTCCATG-‘, à B positions de nucléotides génomiques – et -, respectivement les numéros se réfèrent à GenBank AY L’amplification a été réalisée dans un volume de μL dans × tampon II Applied Biosystems et mmol / Le produit amplifié a été séquencé à l’aide du kit de terminaison Big Dye Applied Biosystems dans un séquenceur ABI Applied BiosystemsCD et les numérations lymphocytaires T CD ont été déterminées par coloration directe de PBMC isolées par des marqueurs ABI. Ficoll-Paque Amersh am Biosciences par des anticorps monoclonaux BD fluorochrome, et l’analyse subséquente a été effectuée par cellule activée par fluorescence tri des réponses FACS IFN-to à la phytohémagglutinine Sigma-Aldrich ont été évaluées par ELISpot enzyme-linked immunospot, qui a été réalisée comme décrit ailleurs , en utilisant des plaques de nitrocellulose Millipore et IFN-Γ Mabtech AB Approval pour l’étude a été obtenue de l’éthique locale Le sérum et les échantillons de PBMC ont été prélevés chez des patients pour la première fois au plus tôt quelques jours après l’apparition des symptômes. L’analyse FACS a révélé une distribution normale des lymphocytes T CD et CD, ainsi réponse normale à la phytohémagglutinine dans les PBMC obtenues chez tous les patients données non montrées Les symptômes présents chez tous les patients étaient des arthralgies et des éruptions érythémateuses Des symptômes supplémentaires, tels que fièvre, malaise, myalgie prononcée et œdème périphérique, étaient présents chez certains patients. cessation des symptômes cliniques aigus c.-à-d. fièvre, exanthème, myalgie et œdème périphérique – semaines après Le groupe de patients a été observé pendant une durée moyenne de plusieurs semaines, semaines Au premier point auquel les échantillons ont été prélevés, les échantillons de sérum contenaient une moyenne de × B geq / mL de sérum, × × × geq / mL Tous les isolats ont été classés dans le génotype B À ce stade, tous les patients ont été testés positifs pour l’IgM B et l’IgG. La charge virale a atteint un pic au moment de l’obtention du premier échantillon ou plus tôt. – geq / mL Le patient a présenté une augmentation de la charge virale après la semaine, mais aucune information épidémiologique ou clinique corrélée à cette observation. Pendant la période d’étude, seul le patient avait une clairance de la virémie périphérique entre les semaines et des taux d’ADN B décelables pendant toute la période de suivi, alors que tous les sujets témoins se sont révélés être B des données négatives sur l’ADN non montrées B Des IgM ont été détectées pendant – des semaines chez tous les patients, sauf pour le patient, chez qui l’IgM B était détectable pendant des semaines

Figure Vue largeDiscrétion de l’ADN BB BB et réponses d’anticorps contre B dans le sérum après infection aiguë chez les patients – P-P, respectivement Le panneau inférieur montre le dernier moment où chaque patient a été testé positif pour les IgM sériques. pour le patient La figure se réfère au nombre de semaines après que le premier échantillon a été prisFigure Vue largeDownload slideCinetics of humain parvovirus BB ADN et les réponses d’anticorps contre B dans le sérum après une infection aiguë chez les patients – P-P, respectivement Le panneau inférieur montre le dernier point Les chiffres indiquent le nombre de semaines après la prise du premier échantillon. Discussion Nous avons évalué la cinétique de l’infection aiguë à B par PCR quantitative chez des individus immunocompétents présentant des symptômes classiques. de l’infection parvovirale Le niveau initial moyen de virus était en ligne Ce qui a été précédemment publié Une diminution rapide de la charge virale a été observée pour le développement de l’IgG B et coïncidente avec la résolution des symptômes cliniques aigus. À la semaine, l’IgM B a été éliminée chez tous les patients, sauf pour le patient. avoir des résultats positifs pendant des semaines; ceci pourrait avoir été le résultat d’anticorps à réaction croisée Les niveaux détectables d’ADN ont été maintenus après le développement des IgG B et la résolution des symptômes chez tous les patients Seuls les patients présentaient une clairance de la virémie périphérique. , nous pouvons conclure que B présente une clairance retardée après infection aiguë De même, l’ADN B a été détecté dans des échantillons de peau, de synovie et de testicule obtenus à partir d’individus sains, IgG-positifs En revanche, les tests PCR dot-blot et nichent montré que la virémie périphérique disparaît des semaines ou des mois après une infection aiguë Aucune donnée quantitative comparable n’est disponible, car des études antérieures ont décrit des patients présentant des symptômes à long terme, des infections persistantes documentées et des présentations sévères lorsque le statut immunitaire n’était pas caractérisé. Des études récentes des réponses immunitaires cellulaires contre B ont révélé que ces réponses augmentent la première année après l’infection, malgré la résolution des symptômes cliniques les lymphocytes T CD spécifiques ont montré une forte fonction effectrice et une capacité de prolifération et de maintenir un phénotype CD activé, avec une forte expression de perforine et CD et la régulation négative de CD et CD L’explication probable de ces observations, qui étaye les présentes constatations, est la persistance de l’antigène à bas niveau. Les faits qu’aucun des sujets témoins en bonne santé inclus dans cette étude n’avait d’ADN B détectable dans les échantillons sériques et que les plus petites des lymphocytes T CD spécifiques détectés chez des individus ayant été infectés dans le passé indiquent que le virus est finalement éliminé du sang périphérique . La nouvelle évidence que B présente une clairance plus lente de la virémie périphérique après une infection aiguë pathogenèse et suggère une nouvelle entité de persistance virale En outre, cette preuve a des implications pratiques sur les moyens de diagnostiquer l’infection B, les moyens de prévenir la transmission nosocomiale de l’infection, et le développement de vaccins – domaines de recherche en évolution permanente. Des études supplémentaires utilisant des techniques nouvelles et sensibles sont nécessaires pour élucider la relation entre B et l’hôte, readdress les mêmes questions posées quand le pathogène a été découvert & gt; il y a des années

Remerciements

Nous remercions les patients et les bénévoles qui ont donné des échantillons de sang pour l’étude. La Fondation Tobias, la Swedish Cancer Foundation et le Swedish Medical Research Council, ainsi que le programme spécifique de recherche et de développement technologique de la Commission européenne “Qualité de vie et gestion des ressources vivantes”. Infection par le parvovirus humain: Vers un meilleur diagnostic et traitement de la compréhension “[QLK-CT–]; Cependant, cet article ne reflète pas nécessairement ses points de vue et n’anticipe en aucune manière la future politique de la Commission européenne dans ce domaine. Conflits d’intérêts potentiels Tous les auteurs: pas de conflits